Homeofarm – Bulk Biotech Lab Suppliers

Enzymetyczny test immunosorpcyjny (ELISA), jako uniwersalna metoda oznaczania mikrocystyn, ma duże znaczenie dla szybkiego wykrywania zanieczyszczenia mikrocystynami. Celem tego badania było zaproponowanie uproszczonej metody walidacji zestawu Microcystins ELISA poprzez podsumowanie powiązanych dokumentów i wytycznych. Po podsumowaniu i wyjaśnieniu 20 parametrów walidacji, wybrano 11 parametrów, aby uprościć walidację zestawu Microcystins ELISA.

Ponadto przeanalizowano dopuszczalny zakres i szczegóły walidacji każdego parametru. Wyniki wskazały, że współczynnik determinacji krzywej standardowej Microcystin-LR był wyższy niż 0,99. Stężenie próbek kontroli jakości mieściło się w granicach kontrolnych. Dokładność próbek wzbogaconych i sprawnych mieściła się w granicach 70%-130%. Zmienność wewnątrz-testowa, między-testowa i odtwarzalność wynosiła odpowiednio mniej niż 11, 15 i 21%.

LOD i LLOQ wynosiły odpowiednio 0,002 μg/L i 0,05 μg/L. Gdy stężenie Mikrocystyn przekraczało 5 μg/L, przed detekcją zalecono rozcieńczenie próbek do zakresu roboczego.

Swoistość oszacowano dla siedmiu analogów Microcystin i trzech aminokwasów, co wskazuje, że reaktywność krzyżowa była mniejsza niż 30%. Wyniki te wykazały, że zestaw ELISA był zadowalający do wykrywania mikrocystyn w wodzie.

• Celem była ocena zastosowania zestawu ELISA na prokalcytoninę bydlęcą (PCT) (Cusabio, Chiny) do oceny PCT w próbkach mleka krowiego. Walidację przeprowadzono przy użyciu 10 próbek osocza i odpowiadających im próbek mleka od krów z zapaleniem sutka.
• Obliczono granicę wykrywalności (LOD). Oceniano współczynnik zmienności (CV%) odczytów pięciu próbek osocza mierzonych pięciokrotnie na tej samej płytce (w ramach testu) i CV% tych samych pięciu próbek odczytanych pięciokrotnie na trzech oddzielnych płytkach. Równoległość określono przez seryjne dwukrotne rozcieńczenia pięciu osocza i odpowiednich próbek mleka.
• Próbki mleka analizowano z wirowaniem i bez. W przypadku PCT osocza metoda wykazała między- i wewnątrz-CV < 23,7%, a równoległość wykazała bardzo dobre wartości odzysku. Badany zestaw ELISA może mierzyć stężenia PCT w osoczu bydła.
• Przeciwciała z zestawu nie wiążą PCT w próbkach mleka, ponieważ wszystkie odwirowane próbki mleka wykazały niższy LOD niż próbki ślepe. Tylko trzy nieodwirowane próbki mleka wykazały mierzalne stężenia PCT. Ze względu na te wyniki, badany komercyjny zestaw ELISA nie mógł być wykorzystany do wykrywania PCT w próbkach mleka.

Ogólnie przyjmuje się, że czysty owies jest bezpieczny dla większości pacjentów z celiakią, a spożywanie owsa zapewnia korzystny błonnik pokarmowy. Jednak owies może być zanieczyszczony białkami glutenu z pszenicy, jęczmienia i/lub żyta. Wyzwanie analityczne polega na niezawodności metody kwantyfikacji i utrzymywaniu poziomu zanieczyszczenia poniżej progu dla żywności bezglutenowej wynoszącej 20 mg/kg. W tym badaniu zbadaliśmy próbki mąki owsianej wzbogaconej jęczmieniem na czterech poziomach za pomocą czterech zestawów gluten ELISA. Największa wariancja odzyskiwania dotyczyła zestawu R5, który dał 5-6-krotne przeszacowanie; zestaw G12 reagował krzyżowo z białkami owsa i dał 4-5-krotne przeszacowanie na wszystkich wysokich poziomach.

Zestawy Total Gluten i Morinaga dały zadowalający powrót do zdrowia. Całkowite hordeiny jęczmienia wyizolowano i scharakteryzowano do wykorzystania jako wspólny kalibrator we wszystkich czterech zestawach w celu ujednolicenia wyników i przetestowania wydajności zestawów. Immunoblotting całkowitego izolatu hordeiny ujawnił, że przeciwciała Total Gluten i Morinaga zapewniają ogólną detekcję, podczas gdy przeciwciała R5 i G12 rozpoznają specyficzne grupy hordein, co prowadzi do większej różnicy, gdy jako kalibratora zastosowano pszenicę i jęczmień. Kalibracja z całkowitym izolatem hordeiny skorygowała problem przeszacowania i zmniejszyła zmienność między czterema zestawami glutenu.

W niniejszym badaniu opracowaliśmy swoisty dla rodzaju test rGroEL _1-524  IgM-ELISA do stosowania w diagnostyce przesiewowej podejrzenia leptospirozy wśród pacjentów z ostrą, niezróżnicowaną chorobą przebiegającą z gorączką podczas ostrej gorączki.

Dokładności diagnostyczne rGroEL _1-524  IgM-ELISA, komercyjnego Panbio IgM-ELISA i Virion-Serion Classic IgG-ELISA zostały ocenione przy użyciu 133 tajskich surowic leptospirozy i 210 kontroli. Czułości wyniosły 91,7%, 59,6% i 17,7% dla ostrego zakażenia, a swoistości odpowiednio 92,6%, 90,2% i 88,3% dla kontroli bez leptospirozy. Test rGroEL _1-524  IgM-ELISA miał wysoką czułość, wynoszącą 92,3% i 91,7%, odpowiednio w przypadku hodowli dodatnich i ujemnych pod względem MAT w 1-3 dni po wystąpieniu objawów (DPO1-3).Stwierdzono zaburzoną swoistość wobec duru plamistego, prawdopodobnie z powodu reakcji krzyżowej przeciwciał z ortologem GroEL. Komercyjne Panbio IgM-ELISA wykazywało czułość przy DPO1-3 30,8% i 41,7% dla przypadków hodowli dodatnich i ujemnych pod względem MAT, podczas gdy Virion-Serion IgG-ELISA wykazywał czułość odpowiednio 5,9% i 13,3 %. Test rGroEL _1-524  IgM-ELISA może być przydatny jako test przesiewowy do wczesnej diagnozy. Wyniki komercyjnego testu ELISA sugerują przydatność testu IgM-ELISA do diagnozy, natomiast test IgG-ELISA jest użyteczny w badaniach seroprewalencji. Zaleca się jednak potwierdzenie za pomocą testów referencyjnych.

Toxoplasma gondii  jest wewnątrzkomórkowym pasożytem odzwierzęcym, który wywołuje infekcje u wielu zwierząt stałocieplnych i ludzi.

Głównym celem tego badania była ocena wartości diagnostycznej rekombinowanego antygenu SAG1 (rSAG1) w  badaniach przesiewowych T. gondii -IgG za pomocą zestawu Human Toxo IgG ELISA Kit (K). rSAG1 wyrażono w  E. coli  (DE3) i oczyszczono za pomocą chromatografii powinowactwa do metalu. rSAG1 potwierdzono metodą immunoblottingu i zawierał prążek o masie 35 kDa. Łącznie 400 ludzkich surowic zostało przebadanych przez LAT i K. Sto dwadzieścia dwie (30,5%) surowice dały wynik dodatni w LAT, a osiemdziesiąt dziewięć (22,25%) surowic dało wynik dodatni w badaniu K. Spośród 400 próbek 80 było wybrany do oceny wydajności K za pomocą komercyjnego  zestawu Toxoplasma gondii  IgG ELISA (C). Spośród 80 surowic ludzkich 55 (68,75%) było dodatnich, 25 (31,25%) dało wynik ujemny, odpowiednio, przez K i C.. Wartość odcięcia dla K wyniosła 0,398 i została obliczona poprzez krzywą charakterystyki operatora odbiornika. Płytki ELISA powleczono w zoptymalizowanym stężeniu rSAG1 = 0,125 µg/ml, a test przeprowadzono przez rozcieńczenie surowic w stosunku 1:50. Zaobserwowano, że czułość i swoistość K wyniosły odpowiednio 98,5% i 100%. Sześć surowic (K ^– L ⁺ ) dało wynik pozytywny w LAT, a te ludzkie surowice zostały później ocenione za pomocą analizy Western blot. Surowice te nie dały prążka odpowiadającego 35 kDa w analizie WB, dlatego LAT dała wyniki fałszywie dodatnie.

Alfaherpeswirus bydlęcy-1 (BoHV-1), czynnik wywołujący zakaźne zapalenie nosa i tchawicy bydła (IBR), jest ważnym ekonomicznie patogenem wirusowym atakującym bydło i bawoły.

Testy serologiczne są najczęściej używane do wykrywania przeciwciał, ale wykryto zmienność w wydajności diagnostycznej poszczególnych testów. W niniejszym badaniu cztery dostępne na rynku zestawy ELISA {dwa pośrednie testy ELISA (zestawy A i B) oraz dwa blokujące testy ELISA (zestawy C i D)} zostały ocenione pod kątem wykrywania przeciwciał przeciwko BoHV-1 u bydła indyjskiego i bawołów (fitness celu). Czułość diagnostyczną (dsn) i specyficzność (dsp) tych zestawów określono trzema sposobami; uznając test neutralizacji wirusa (VNT) za złoty standard testu, wykorzystując informacje o próbkach i większości testów przed testem. Badanie przesiewowe 200 znanych surowic negatywnych (124 bydła, 76 bawołów) pochodzących z gospodarstw wolnych od IBR wykazało, że zestawy ELISA oparte na gB są bardziej specyficzne niż zestawy do pośredniego testu ELISA.

Testowanie 125 znanych surowic dodatnich (81 bydła, 44 bawołów) sugeruje, że najbardziej wrażliwy jest zestaw B, a następnie zestaw C, A i D . Co ciekawe, zestaw D okazał się najbardziej czuły na wykrywanie przeciwciał BoHV-1 wywołanych szczepieniem, a następnie zestaw B. Podobną tendencję zaobserwowano również w eksperymencie granicy rozcieńczenia przeprowadzonego przy użyciu znanych zakażonych i zaszczepionych surowic. Stwierdzono, że VNT jest najbardziej specyficznym testem, a jego zastosowanie jako testu złotego standardu wykazało, że wszystkie zestawy mają ponad 99% czułość.

Wszystkie zestawy ELISA mogą wykryć przeciwciała swoiste wobec BoHV-1 u cieląt zaszczepionych IBR już 11 dni po szczepieniu. W statystykach Kappa odnotowano prawie idealną zgodność między zestawami ELISA. Ogólna wydajność zestawów w serodiagnostyce IBR, określona przez pole pod krzywą w analizie ROC, była dobra.