Cel Przygotowanie uniwersalnych przeciwciał drugorzędowych, które mogą wiązać się z IgG myszy i królików oraz wykorzystywać przeciwciała w różnych testach immunologicznych. Metody Geny fuzyjne gronkowcowego białka A (SPA), paciorkowca białka G (SPG) i peroksydazy chrzanowej (HRP) zsyntetyzowano i sklonowano do wektora pcDNATM 3.1 w celu wytworzenia eukariotycznych plazmidów ekspresyjnych. Plazmidy przejściowo transfekowano do komórek HEK293F w celu ekspresji.

Białko fuzyjne eksprymowane w plazmidzie wykrywano metodą SDS-PAGE i Western blotting, a jego immunoaktywność mierzono metodą Western blotting, ELISA i barwieniem immunohistochemicznym. Wyniki Trawienie enzymami restrykcyjnymi i sekwencjonowanie genów wykazały, że udało się stworzyć plazmidy pPA-HRP, pPG-HRP i pPA/G-HRP. Barwienie brylantowym błękitem Coomassie i Western blot wykazały, że białka fuzyjne PA-HRP, PG-HRP i PA/G-HRP z powodzeniem ulegały ekspresji w komórkach HEK293F. Western blot, ELISA i barwienie immunohistochemiczne wykazały, że IgG pochodzące od myszy i królików mogą być rozpoznawane i wiązane przez trzy rodzaje białek fuzyjnych, z których białko fuzyjne PA/G-HRP wykazywało najwyższe powinowactwo.

 

Zwierzęta transgeniczne zawierające geny ludzkich przeciwciał są niezwykle atrakcyjne dla opracowywania leków, ponieważ omijają późniejsze procedury humanizacji przeciwciał wymagane do terapeutycznej translacji.

 

  • Platformy transgeniczne zostały stworzone wcześniej przy użyciu myszy, ale ostatnio także szczurów, kurczaków i krów, i są obecnie powszechnie wykorzystywane do opracowywania leków. Jednak generowanie przeciwciał na bazie królików, z dużymi osiągnięciami w zakresie swoistości i powinowactwa, jest w stanie obejmować dywersyfikację sekwencji za pośrednictwem konwersji genów, tym samym wzmacniając dojrzewanie wiązania i poprawiając wariancję/selekcję przeciwciał wyjściowych w inny sposób niż u gryzoni.
  • Ponieważ dodatkowo często umożliwia dobre generowanie dobrego wiązania przeciwko antygenom, które są tylko słabo immunogenne w innych organizmach, jest bardzo interesującym gatunkiem do wytwarzania przeciwciał terapeutycznych. Opisujemy tutaj wytwarzanie, wykorzystanie i analizę pierwszego transgenicznego szczepu królika do produkcji ludzkich przeciwciał.
  • Poprzez nokaut endogennych genów IgM i wprowadzenie sekwencji ludzkiej immunoglobuliny, ten szczep królika został tak skonstruowany, aby generować bardzo zróżnicowany repertuar ludzkich przeciwciał IgG. Ponadto wprowadziliśmy ludzkie geny CD79a/b i Bcl2 (chłoniak z komórek B 2), które zwiększają ekspresję receptora komórek B i przeżycie komórek B.
  • Po immunizacji przeciwko angiogennemu czynnikowi BMP9 (białka morfogenetyczne kości 9), byliśmy w stanie wyizolować z tych królików zestaw znakomicie powinowatych i swoistych przeciwciał neutralizujących. Analiza sekwencji tych środków wiążących wykazała, że ​​zarówno hipermutacja somatyczna, jak i konwersja genów są w pełni funkcjonalne w tym szczepie, bez uszczerbku dla bardzo wysokiego stopnia człowieczeństwa. Ta potężna nowa strategia transgeniczna pozwoli na dalszą ekspansję wykorzystania endogennych mechanizmów odpornościowych w opracowywaniu leków.

Zapalenie płuc wywołane przez Staphylococcus aureus wiąże się z wysoką śmiertelnością, niezależnie od wrażliwości na antybiotyki.

Zarówno szczepy MRSA, jak i MSSA wytwarzają silne cytotoksyny: alfa-hemolizynę (Hla) i do pięciu leukocydyn – LukSF-PV, HlgAB, HlgCB, LukED i LukGH (LukAB) – w celu uniknięcia wrodzonych mechanizmów obronnych gospodarza. Wykazano, że neutralizujące cytotoksyny zapewniają korzyści w zakresie przeżycia w modelach królików z zapaleniem płuc wywołanym przez S. aureus. Zbadaliśmy mechanizmy ochrony ASN100, kombinacji dwóch ludzkich przeciwciał monoklonalnych (mAb), ASN-1 i ASN-2, które razem neutralizują Hla i pięć leukocydyn, w modelach zapalenia płuc królika MRSA i MSSA.

Po profilaktycznej immunizacji biernej ASN100 wykazywał zależny od dawki wzrost przeżycia i był w pełni ochronny przed wszystkimi testowanymi szczepami S. aureus przy dawkach 5 lub 20 mg/kg. Makroskopową i mikroskopową patologię płuc, szybkość obrzęków i obciążenie bakteriami oceniono 12 godzin po zakażeniu i zmniejszono za pomocą ASN100. Analiza farmakokinetyczna ASN100 w płynie z płukania oskrzelowo-pęcherzykowego od niezakażonych zwierząt wykazała skuteczną penetrację płynu wyściółkowego nabłonka płuc, osiągając szczytowe poziomy między 24 a 48 godzinami po podaniu, które były porównywalne ze stężeniem mAb zmierzonym w surowicy. Dane te potwierdzają, że mAb ASN100 neutralizują silne cytotoksyny S. aureus w płucach i zapobiegają uszkodzeniu bariery śluzówkowej i wrodzonych komórek odpornościowych.

Autorzy opisują preparatykę złocisto-platynowych nanokwiatów (AuPt NFs) i wykazują, że mogą one być jednocześnie stosowane jako znacznik i jako enzym naśladujący w testach immunologicznych z przepływem bocznym (LFI).

AuPt NF zostały przygotowane przez hodowanie nanodrutów Pt na powierzchni nanocząstek złota. Test obejmuje wychwytywanie białek docelowych (tutaj: króliczej IgG jako analitu modelowego) przez unieruchomione przeciwciało wychwytujące oraz przy użyciu przeciwciała drugorzędowego znakowanego AuPt NF. W ten sposób AuPt NF są wychwytywane przez strefę testową i wytwarzają charakterystyczny czarny pasek do wizualnego wykrywania antygenu (IgG). Zabarwienie linii testowej można dodatkowo wzmocnić przez dodanie substratu chromogennego3-amino-9-etylokarbazol, który jest katalitycznie utleniany przez wychwycone nanodruty Pt na AuPt NF i wytwarza czerwone zabarwienie. Wyniki ilościowe uzyskano poprzez odczytanie natężeń linii testowych za pomocą przenośnego czytnika pasków. LFI ma granicę wykrywalności 5 pg mL-1 dla IgG w zoptymalizowanych warunkach eksperymentalnych. To 100 razy mniej niż w przypadku konwencjonalnego LFI opartego na AuNP.

Niewykluczone, że test ten ma szeroki zakres, ponieważ może być stosowany do wielu innych celów, dla których dostępne są odpowiednie przeciwciała. Graficzne streszczenie Nanokwiaty złota i platyny są używane jako etykieta i jako naśladujący enzym w wysoce czułym teście immunologicznym z przepływem bocznym na IgG. Granica wykrywalności testu przepływu bocznego opartego na nanokwiatkach złota i platyny jest 100 razy niższa niż w przypadku konwencjonalnego testu przepływu bocznego opartego na nanocząsteczkach złota.

Der p 5 jest jednym z ważnych alergenów roztoczy kurzu domowego w Algierii; ten alergen jest często rozpoznawany przez pacjentów z astmą alergiczną. Jednak nie ma informacji na temat jego epitopów wiążących IgG. W niniejszym badaniu króliki immunizowano rekombinowanym alergenem Der p 5 i pobrano próbki surowicy. Rozpoznawanie liniowych epitopów IgG Der p 5 określono przy użyciu zsyntetyzowanych peptydów pochodzących z sekwencji alergenu.

Ibrutinib drug-Human IgG Conjugate

IBT17-IgG Alpha Diagnostics 100 ug 529 EUR

Rabbit Immunoglobulin G (IgG) ELISA Kit

DLR-IgG-Rb-48T DL Develop 48T 337 EUR

Rabbit Immunoglobulin G (IgG) ELISA Kit

DLR-IgG-Rb-96T DL Develop 96T 426 EUR

Rabbit Immunoglobulin G (IgG) ELISA Kit

RDR-IgG-Rb-48Tests Reddot Biotech 48 Tests 331 EUR

Rabbit Immunoglobulin G (IgG) ELISA Kit

RDR-IgG-Rb-96Tests Reddot Biotech 96 Tests 451 EUR

Phenylbutyrate Na

P007-1GM Arbor Assays 1GM 126 EUR

IBMX

P019-1GM Arbor Assays 1GM 245 EUR

Bovine Immunoglobulin G (IgG) ELISA Kit

DLR-IgG-b-48T DL Develop 48T 456 EUR

Bovine Immunoglobulin G (IgG) ELISA Kit

DLR-IgG-b-96T DL Develop 96T 590 EUR

Canine Immunoglobulin G (IgG) ELISA Kit

DLR-IgG-c-48T DL Develop 48T 441 EUR

Canine Immunoglobulin G (IgG) ELISA Kit

DLR-IgG-c-96T DL Develop 96T 570 EUR

Equine Immunoglobulin G (IgG) ELISA Kit

DLR-IgG-Eq-48T DL Develop 48T 360 EUR

Equine Immunoglobulin G (IgG) ELISA Kit

DLR-IgG-Eq-96T DL Develop 96T 457 EUR

Goat Immunoglobulin G (IgG) ELISA Kit

DLR-IgG-g-48T DL Develop 48T 464 EUR

Goat Immunoglobulin G (IgG) ELISA Kit

DLR-IgG-g-96T DL Develop 96T 601 EUR

Human Immunoglobulin G (IgG) ELISA Kit

DLR-IgG-Hu-48T DL Develop 48T 239 EUR

Human Immunoglobulin G (IgG) ELISA Kit

DLR-IgG-Hu-96T DL Develop 96T 292 EUR

Mouse Immunoglobulin G (IgG) ELISA Kit

DLR-IgG-Mu-48T DL Develop 48T 328 EUR

Mouse Immunoglobulin G (IgG) ELISA Kit

DLR-IgG-Mu-96T DL Develop 96T 415 EUR

Porcine Immunoglobulin G (IgG) ELISA Kit

DLR-IgG-p-48T DL Develop 48T 456 EUR

Porcine Immunoglobulin G (IgG) ELISA Kit

DLR-IgG-p-96T DL Develop 96T 590 EUR

Rat Immunoglobulin G (IgG) ELISA Kit

DLR-IgG-Ra-48T DL Develop 48T 334 EUR

Rat Immunoglobulin G (IgG) ELISA Kit

DLR-IgG-Ra-96T DL Develop 96T 422 EUR

Bovine Immunoglobulin G (IgG) ELISA Kit

RDR-IgG-b-48Tests Reddot Biotech 48 Tests 473 EUR

Bovine Immunoglobulin G (IgG) ELISA Kit

RDR-IgG-b-96Tests Reddot Biotech 96 Tests 654 EUR

Canine Immunoglobulin G (IgG) ELISA Kit

RDR-IgG-c-48Tests Reddot Biotech 48 Tests 455 EUR

Canine Immunoglobulin G (IgG) ELISA Kit

RDR-IgG-c-96Tests Reddot Biotech 96 Tests 629 EUR

Equine Immunoglobulin G (IgG) ELISA Kit

RDR-IgG-Eq-48Tests Reddot Biotech 48 Tests 358 EUR

Equine Immunoglobulin G (IgG) ELISA Kit

RDR-IgG-Eq-96Tests Reddot Biotech 96 Tests 490 EUR

Goat Immunoglobulin G (IgG) ELISA Kit

RDR-IgG-g-48Tests Reddot Biotech 48 Tests 482 EUR

Goat Immunoglobulin G (IgG) ELISA Kit

RDR-IgG-g-96Tests Reddot Biotech 96 Tests 667 EUR

Human Immunoglobulin G (IgG) ELISA Kit

RDR-IgG-Hu-48Tests Reddot Biotech 48 Tests 216 EUR

Human Immunoglobulin G (IgG) ELISA Kit

RDR-IgG-Hu-96Tests Reddot Biotech 96 Tests 287 EUR

Mouse Immunoglobulin G (IgG) ELISA Kit

RDR-IgG-Mu-48Tests Reddot Biotech 48 Tests 321 EUR

Mouse Immunoglobulin G (IgG) ELISA Kit

RDR-IgG-Mu-96Tests Reddot Biotech 96 Tests 438 EUR

Porcine Immunoglobulin G (IgG) ELISA Kit

RDR-IgG-p-48Tests Reddot Biotech 48 Tests 473 EUR

Porcine Immunoglobulin G (IgG) ELISA Kit

RDR-IgG-p-96Tests Reddot Biotech 96 Tests 654 EUR

Rat Immunoglobulin G (IgG) ELISA Kit

RDR-IgG-Ra-48Tests Reddot Biotech 48 Tests 328 EUR

Rat Immunoglobulin G (IgG) ELISA Kit

RDR-IgG-Ra-96Tests Reddot Biotech 96 Tests 447 EUR

Bovine Immunoglobulin G (IgG) ELISA Kit

RD-IgG-b-48Tests Reddot Biotech 48 Tests 453 EUR

Bovine Immunoglobulin G (IgG) ELISA Kit

RD-IgG-b-96Tests Reddot Biotech 96 Tests 625 EUR

Porcine Immunoglobulin G (IgG) ELISA Kit

RD-IgG-p-48Tests Reddot Biotech 48 Tests 453 EUR

Porcine Immunoglobulin G (IgG) ELISA Kit

RD-IgG-p-96Tests Reddot Biotech 96 Tests 625 EUR

Rat Immunoglobulin G (IgG) ELISA Kit

RD-IgG-Ra-48Tests Reddot Biotech 48 Tests 314 EUR

Rat Immunoglobulin G (IgG) ELISA Kit

RD-IgG-Ra-96Tests Reddot Biotech 96 Tests 428 EUR

Rabbit IgG

E61I018 EnoGene 1mg 343 EUR

Rabbit IgG

1268-100 Biovision 153 EUR

Rabbit IgG

1268-1000 Biovision 370 EUR

Rabbit IgG

31-1007 Fitzgerald 1 g 350 EUR

Rabbit IgG

31R-1049 Fitzgerald 10 mg 136 EUR

Rabbit IgG

31R-AR002 Fitzgerald 25 mg 381 EUR

Guinea pig Immunoglobulin G (IgG) ELISA Kit

DLR-IgG-Gu-48T DL Develop 48T 315 EUR

Guinea pig Immunoglobulin G (IgG) ELISA Kit

DLR-IgG-Gu-96T DL Develop 96T 396 EUR

Guinea pig Immunoglobulin G (IgG) ELISA Kit

RDR-IgG-Gu-48Tests Reddot Biotech 48 Tests 305 EUR

Guinea pig Immunoglobulin G (IgG) ELISA Kit

RDR-IgG-Gu-96Tests Reddot Biotech 96 Tests 415 EUR

Rabbit Control IgG

AC005 Abclonal 100 ul 133 EUR

Rabbit IgG Protein

abx061435-1g Abbexa 1 g 599 EUR

Goat Rabbit IgG

A21020-01ml Abbkine 0.1ml 77 EUR

Goat Rabbit IgG

A21020-05ml Abbkine 0.5ml 158 EUR

Rabbit Goat IgG

A21030-01ml Abbkine 0.1ml 77 EUR

Rabbit Goat IgG

A21030-05ml Abbkine 0.5ml 158 EUR

Goat Rabbit IgG

A21120-01ml Abbkine 0.1ml 93 EUR

Goat Rabbit IgG

A21120-05ml Abbkine 0.5ml 224 EUR

Goat Rabbit IgG

A21220-01ml Abbkine 0.1ml 77 EUR

Goat Rabbit IgG

A21220-05ml Abbkine 0.5ml 158 EUR

Goat Rabbit IgG

A22120-01ml Abbkine 0.1ml 77 EUR

Goat Rabbit IgG

A22120-05ml Abbkine 0.5ml 158 EUR

Goat Rabbit IgG

A22220-01ml Abbkine 0.1ml 77 EUR

Goat Rabbit IgG

A22220-05ml Abbkine 0.5ml 158 EUR

Goat Rabbit IgG

A23020-01ml Abbkine 0.1ml 93 EUR

Goat Rabbit IgG

A23020-05ml Abbkine 0.5ml 224 EUR

Goat Rabbit IgG

A23120-01ml Abbkine 0.1ml 93 EUR

Goat Rabbit IgG

A23120-05ml Abbkine 0.5ml 224 EUR

Rabbit Goat IgG

A23130-01ml Abbkine 0.1ml 93 EUR

Rabbit Goat IgG

A23130-05ml Abbkine 0.5ml 224 EUR

Goat Rabbit IgG

A23220-01ml Abbkine 0.1ml 93 EUR

Goat Rabbit IgG

A23220-05ml Abbkine 0.5ml 224 EUR

Rabbit Goat IgG

A23230-01ml Abbkine 0.1ml 93 EUR

Rabbit Goat IgG

A23230-05ml Abbkine 0.5ml 224 EUR

Goat Rabbit IgG

A23320-01ml Abbkine 0.1ml 93 EUR

Goat Rabbit IgG

A23320-05ml Abbkine 0.5ml 224 EUR

Rabbit Goat IgG

A23330-01ml Abbkine 0.1ml 93 EUR

Rabbit Goat IgG

A23330-05ml Abbkine 0.5ml 224 EUR

Goat Rabbit IgG

A23420-01ml Abbkine 0.1ml 93 EUR

Goat Rabbit IgG

A23420-05ml Abbkine 0.5ml 224 EUR

Rabbit Goat IgG

A23430-01ml Abbkine 0.1ml 93 EUR

Rabbit Goat IgG

A23430-05ml Abbkine 0.5ml 224 EUR

Goat Rabbit IgG

A23620-01ml Abbkine 0.1ml 93 EUR

Goat Rabbit IgG

A23620-05ml Abbkine 0.5ml 224 EUR

Rabbit Goat IgG

A23630-01ml Abbkine 0.1ml 93 EUR

Rabbit Goat IgG

A23630-05ml Abbkine 0.5ml 224 EUR

Goat Rabbit IgG

A23720-01ml Abbkine 0.1ml 93 EUR

Goat Rabbit IgG

A23720-05ml Abbkine 0.5ml 224 EUR

Goat Rabbit IgG

A23920-01ml Abbkine 0.1ml 93 EUR

Goat Rabbit IgG

A23920-05ml Abbkine 0.5ml 224 EUR

Rabbit Rubella IgG

QY-E30313 Qayee Biotechnology 96T 374 EUR

Rabbit Measles IgG

QY-E30314 Qayee Biotechnology 96T 374 EUR

Rabbit IgG-UNLB

LF-SA8070U Abfrontier 10 mg Ask for price

Rabbit IgG (HRP)

65C-CH1103 Fitzgerald 1 mg 247 EUR

Rabbit IgG (Fc)

31C-CH1104 Fitzgerald 1 mg 403 EUR

 

Wyniki wykazały, że surowica z immunizowanych królików rozpoznawała trzy liniowe epitopy z Der p 5 ( 28 EDKKHDYQNEFDFLLMERIHEQIK43 ) , ( 37IHEQIKKGELALFYLQEQ55 ) i 92LMQRKDLDIFEQYNLEMAKKS112 ) Co ciekawsze, zaobserwowaliśmy, że  sekwencja aminokwasowa 92 L-S 112  jest dobrze rozpoznawana zarówno przez przeciwciała IgE, jak i IgG. Der p 5 stymuluje syntezę specyficznych przeciwciał IgG, które rozpoznają wspólne, ale także nowe epitopy w porównaniu z wiązaniem przeciwciał IgE. Rzeczywiście, potencjał do indukowania przeciwciał IgG można wykorzystać do hamowania wiązania ludzkiej IgE z alergenami, co może być częścią mechanizmu działania swoistej immunoterapii.

Leave a Reply

Your email address will not be published.